Las células de Kupffer y sus mediadores

Descrpcion:
De activación de los macrófagos postraumático aumenta el desarrollo de
la inflamación sistémica / inmunosupresión y disfunción orgánica.
Nuestra hipótesis es que las células de Kupffer son la principal
fuente de proteína quimiotáctica de monocitos-1 (MCP-1) la producción
de la hemorragia después de un trauma, que la administración de
estradiol-17-estradiol (E2) después de un traumatismo hemorragia
modula la liberación de MCP-1 y reduce el daño de órganos a distancia,
y que los efectos saludables de E2 son mediados a través del receptor
de estrógeno (ER) -.
Hipótesis

Para probar estas hipótesis, los ratones hembra B57BL/J6 recibido E2
(50 μg/25 g) o de un vehículo después de un traumatismo, hemorragia y
mujeres 129 Sve ER-ß-/ - ratones transgénicos y ovariectomizadas
ratones de tipo salvaje recibido E2, o ER-agonista de propilo triol
pirazol (50 μg/25 g) después de un trauma hemorragia. MCP-1 sistémica
y la interleucina-6 y su liberación por el hígado, el bazo y los
macrófagos pulmonares se determinaron por citometría de flujo de 4
horas después del trauma hemorragia. Antes de la depleción de células
de Kupffer con cloruro de gadolinio disminuyó significativamente
sistémica MCP-1 y la interleucina-6 después de un traumatismo de
hemorragia y se asocia con disminución del edema / infiltración de
neutrófilos en el pulmón y el hígado. Las células de Kupffer eran los
macrófagos sólo muestra los importantes MCP-1 de liberación, que se
redujo notablemente por el E2, o triol pirazol propilo en tipo salvaje
y en ER-ß-/ - ratones. El tratamiento previo de los ratones con
anticuerpos anti-MCP-1 antisuero impedido un aumento de la
mieloperoxidasa y edema en los pulmones y el hígado. Estos hallazgos
sugieren que las células de Kupffer derivados de MCP-1 juega un papel
importante en la disfunción de órganos a distancia después de un
trauma-la hemorragia.
La muerte después de un trauma múltiple se produce de forma inmediata
en la escena de un accidente o dentro de los horarios del evento.
Estas muertes se debe principalmente a la gravedad de las lesiones o
complicaciones directas de la lesión primaria (por ejemplo, la
hemorragia masiva o grave lesión cerebral traumática). Los pacientes
que sobreviven de la lesión inicial pueden desarrollar complicaciones
en los sistemas de órganos diferentes, no necesariamente afectada por
el trauma principal, en cuestión de días o incluso semanas después del
trauma. En este grupo, la mayoría de los pacientes mueren a causa de
infecciones graves y la disfunción múltiple de órganos syndrome.1
Los macrófagos juegan un papel importante en la regulación de la
respuesta inmune después de un traumatismo, shock y sepsis.2-6
estimulación de los macrófagos es reconocida como una reacción
fisiológica del organismo para restablecer la homeostasis. Sin
embargo, la activación excesiva y prolongada de los macrófagos, en
combinación con otros leucocitos y las células endoteliales, también
contribuye significativamente al desarrollo del síndrome de respuesta
inflamatoria sistémica y la inmunosupresión postraumático, que en
última instancia, puede resultar en disfunción orgánica múltiple
syndrome.7-9 Estos cambios desadaptativos en función de las células se
ha demostrado que puede prevenir por los esteroides sexuales (por
ejemplo, 17ß-estradiol), que están implicados en la regulación de los
mediadores de la inflamación de macrófagos production.10, 11 de
Las células de Kupffer representan por mucho la mayor población de
macrófagos tisulares, que comprende 80 a 90% de las tiendas de
tejidos. Las células de Kupffer desempeñar un papel clave en la
respuesta inmune a varios niveles bajos de flujo de conditions9, 12,13
a través de la secreción de mediadores inflamatorios que tienen
importantes efectos sistémicos. La citocina proinflamatoria
interleucina-6 (IL-6), por ejemplo, que se ha demostrado para
participar significativamente en la cascada de eventos que conducen a
la lesión de órganos a distancia y el aumento de la susceptibilidad
del huésped a la sepsis post-traumático, se demostró que era
principalmente producida por las células de Kupffer después de un
traumatismo -hemorrhage.9, 14
Proteína quimiotáctica de monocitos 1 (MCP-1) también es liberado por
activa Kupffer cells.15 MCP-1, un miembro de la familia de las
quimiocinas CC, desempeña un papel importante en la respuesta
inflamatoria por mediación de migración dirigida de los monocitos y
macrófagos in vivo en varios modelos inflamatorios (ligadura cecal y
punción, peritonitis, isquemia / reperfusión) .15-18 Además de la
contratación de estas células, MCP-1 también puede activar los
macrófagos y endoteliales cells.17 ,19-21 Estudios recientes también
han proporcionado pruebas de que MCP -1 participa significativamente
en la atracción de neutrófilos y la generación de neutrófilos del
tejido depende damage.16, 20 Además de las células de Kupffer, varios
otros tipos de células (linfocitos, células del músculo liso,
plaquetas) son capaces de producir MCP-1.16, 17, 19,20,22 macrófagos
de otros órganos (por ejemplo, los pulmones y el bazo) son importantes
fuentes potenciales de esta quimioquina. Por ejemplo, los macrófagos
alveolares demostrado un incremento significativo de MCP-1 después de
una expresión de ARNm insult.23 infecciosas
Información sobre las funciones de los macrófagos, y en particular la
pronta liberación de mediadores como la MCP-1, debe permitir la
intervención inmunomoduladores encaminadas a mejorar la fase de
hiperinflamatoria, que puede conducir a la prevención del daño de
órganos a distancia y la mortalidad después de un traumatismo. Por lo
tanto, examinar si las células de Kupffer son la principal fuente de
MCP-1 sistémica después de un traumatismo y la hemorragia si la caída
de MCP-1 de liberación contribuye a una reducción de daño de órganos a
distancia. Nuestra hipótesis es que las células de Kupffer son la
principal fuente de producción de MCP-1 después de un traumatismo y la
hemorragia que la modulación de MCP-1 por la liberación E2, o el
receptor de estrógeno (ER) - agonista triol pirazol propilo (PPT)
reducirá el daño de órganos a distancia. Para este estudio, los
animales fueron tratados con cloruro de gadolinio (GdCl3), que se sabe
que extirpar las células de Kupffer, 9,14 y el efecto de la depleción
de células de Kupffer se examinó en sistémica MCP-1, así como en el
hígado y el daño tisular pulmonar después de la trauma hemorragia. En
estudios adicionales, el efecto de 17ß-estradiol (E2) sobre estos
parámetros y MCP-1 capacidad de liberación de los macrófagos tisulares
diferentes (hígado, pulmón, bazo), fue determinado.
Animales y grupos experimentales
Todos los estudios realizados en animales se realizaron en conformidad
con las directrices de los Institutos Nacionales de Salud y fueron
aprobadas por el cuidado animal y Uso Comité Institucional de la
Universidad de Alabama en Birmingham. Ratones de B57BL/J6 Hombre (no
proestro), de 8 a 12 semanas de edad y un peso de 19 a 23 g, fueron
obtenidos de los Laboratorios Charles River (Wilmington, MA). Estos
animales fueron tratados con GdCl3 o 17ß-estradiol (E2). Además,
ER-ß-mujer / - ratones transgénicos (129 SVE) y el correspondiente
tipo salvaje (WT) animales (12 meses, 28 a 32 g de peso corporal)
fueron incluidos en este estudio para determinar si ER-desempeña un
papel en la la regulación de la función inmune. Estos animales fueron
ovariectomizadas en 6 semanas de edad. El ER-ß ratones KO fueron
amablemente proporcionados por la Dra. Heather Harris y los Recursos
Biológicos de Wyeth Research. Estos animales recibieron E2, o la
ER-PPT agonista de la hemorragia después de un traumatismo.
Cloruro de gadolinio (GdCl3)
Cuarenta y ocho horas antes de trauma hemorragia u operación simulada,
un grupo de ratones recibieron una inyección intravenosa de GdCl3 en
la vena de la cola (10 mg / kg de peso corporal) para extirpar las
células de Kupffer. Los controles recibieron una inyección intravenosa
de vehículo (suero salino al 0,9%), al mismo tiempo point.9, 24,25
17-ß estradiol y ER-agonistas PPT
La administración subcutánea del vehículo (dimetilsulfóxido) se
realizó después de la finalización de la operación simulada. En los
traumatismos grupos de hemorragia, E2 (50 μg/25 g), PPT (50 μg/25 g),
o vehículo (dimetilsulfóxido) se inyecta por vía subcutánea
inmediatamente antes del inicio de la reanimación con líquidos.
Trauma-Hemorragia Procedimiento
Ratones en el trauma de los grupos de hemorragia fueron anestesiados
con isoflurano (Minrad, Bethlehem, PA) y contenida en un position.26
una laparotomía media en posición supina, se realizó, que fue cerrada
en dos capas con suturas (Ethilon 6 / 0; Ethicon, Somerville, NJ).
Ambas arterias femoral y la vena femoral derecha se canula con tubos
de polietileno (Becton-Dickinson, Sparks, MD). La presión arterial se
midió a través de una de las líneas arterial con un analizador de la
presión arterial (Micro-Med, Louisville, KY). A los 10 minutos después
de despertarse, los animales fueron sangrados a través del catéter
arterial otros un medio de presión arterial de 35,0 ± 5,0 mm Hg, que
se mantuvo durante 90 minutos. Al final del procedimiento, los
animales fueron reanimados a través de la vía venosa con un volumen
cuatro veces la sangre derramada utilizar el lactato de Ringer.
Después de retirar los catéteres, se cerraron las incisiones.
Sham-operados los animales sometidos a los mismos procedimientos
quirúrgicos, pero no eran ni una hemorragia ni resucitado.
Procedimientos de cosecha
Los animales fueron anestesiados con isoflurano de nuevo y se
sacrificaron 4 horas después de la operación simulada o la realización
de la reanimación en el trauma de los grupos de la hemorragia. La
sangre fue obtenida a través de punción cardíaca usando una jeringa
recubierta con ácido etilendiaminotetraacético (Sigma, St. Louis, MO).
La sangre se centrifuga (10.000 rpm, 10 minutos, 4 ° C) y el plasma
almacenado a -80 ° C hasta que un análisis más profundo. Por otra
parte, pulmón, bazo y el hígado fueron eliminados de forma aséptica.
Determinación de húmedo a seco Ratios de
Húmedo a seco de relaciones de pulmón (pulmón izquierdo) e hígado
(lóbulo derecho) fueron utilizados como medida de tejido edema.27
muestras de tejido fueron pesadas inmediatamente después de la
eliminación (peso húmedo) y luego sometidos a la desecación en estufa
a 95 ° C (Blue M, Asheville, Carolina del Norte) hasta un peso en seco
estable se alcanzó después de 48 horas. La relación entre el húmedo a
peso seco fue calculado.
Referencias:
1. Roumen RM, Redl H, Schlag G, Zilow G, Sandtner W, Koller W,
Hendriks T, Goris RJ: Inflammatory mediators in relation to the
development of multiple organ failure in patients after severe blunt
trauma. Crit Care Med 1995, 23:474-480[CrossRef][Medline]
2. Czura CJ, Friedman SG, Tracey KJ: Neural inhibition of
inflammation: the cholinergic anti-inflammatory pathway. J Endotox Res
2003, 9:409-413[CrossRef]
3. Harbrecht BG, Billiar TR: The role of nitric oxide in Kupffer
cell-hepatocyte interactions. Shock 1995, 3:79-87
4. Sitio web: http://ajp.amjpathol.org/cgi/content/full/169/3/784?ck=nck
Hecho por:
Willson A Mendoza C.
C.I:16.959.604
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